骨髓細(xì)胞微核試驗是什么 試驗方法有哪些

13次 2025.01.17

　　?骨髓細(xì)胞微核試驗是一種重要的毒理學(xué)檢測方法，能夠快速、靈敏地檢測物質(zhì)對細(xì)胞核遺傳結(jié)構(gòu)的改變情況，對評價某種物質(zhì)對DNA損傷的影響具有重要的毒性評價價值?。


　　骨髓細(xì)胞微核試驗介紹


　　骨髓細(xì)胞微核試驗是一種?檢測染色體畸變或評價化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)染色體損傷的實驗方法??。它基于染色體損傷和干擾細(xì)胞有絲分裂的化學(xué)毒物會導(dǎo)致微核形成的原理?。


　　微核是存在于細(xì)胞中主核之外的一種顆粒，大小相當(dāng)于細(xì)胞直徑的1/20\~1/5，呈圓形或杏仁狀，其染色與細(xì)胞核一致?。在間期細(xì)胞中，微核可以出現(xiàn)一個或多個，通常認(rèn)為是細(xì)胞內(nèi)染色體斷裂或紡錘絲受影響而在細(xì)胞有絲分裂后期滯留在細(xì)胞核外的遺傳物質(zhì)?。


　　骨髓細(xì)胞微核試驗最常用的是嚙齒類動物（如小鼠）骨髓嗜多染紅細(xì)胞（PCE）微核試驗?。這是因為嗜多染紅細(xì)胞是分裂后期的紅細(xì)胞，此時紅細(xì)胞的主核已經(jīng)排出，胞質(zhì)內(nèi)含有核糖體，吉姆薩（Giemsa）染色呈灰藍(lán)色，微核容易辨認(rèn)，且微核自發(fā)率低?。


　　試驗過程中，通過給嚙齒類動物染毒，然后處死取其骨髓，經(jīng)過制片、固定、染色后，在顯微鏡下計數(shù)PCE中的微核數(shù)量，以此來評價化學(xué)物質(zhì)的遺傳毒性?。


　　此外，骨髓細(xì)胞微核試驗具有簡便、快速的特點，可作為誘突變物的初篩試驗方法?。通過觀察骨髓細(xì)胞中的微核率，可以檢驗藥物是否具有致突變作用，為化學(xué)物質(zhì)的安全性評估提供重要依據(jù)?。


　　骨髓細(xì)胞微核試驗方法


　?。?）?選擇實驗動物?：


　　常用小鼠，體重在20-24克，雌雄均可。


　　每組動物10只，可設(shè)3-4個劑量組，同時設(shè)陰性對照組和陽性對照組?。


　?。?）?染毒途徑與劑量?：


　　染毒途徑依受試物定，選擇與人時間接觸方式相似的方式。


　　染毒劑量以LD50的1/5-1/50為好?。


　?。?）?骨髓細(xì)胞微核分析片準(zhǔn)備?：


　　迅速取胸骨及部分肋骨，剔除肌肉組織及表面結(jié)締組織。


　　沿胸骨剪掉多余肋骨，用濾紙或紗布將胸骨擦凈。


　　取載波片，標(biāo)記后，用滴管取小牛血清在載波片一端滴一滴小牛血清。


　　剪去骨骺端，用彎止血鉗將骨髓擠至盛有一滴小牛血清的玻片上，混勻，用推片將其推成薄厚均勻的片子，自然干燥?。


　?。?）?固定與染色?：


　　片膜干后用甲醇固定15分鐘，晾干。


　　干燥后用吸管吸取10%Giemsa染液滴滿載玻片，染色10-15分鐘。


　　染色完畢，自來水沖洗載波片背面?。


　?。?）?觀察與計數(shù)?：


　　通常計數(shù)PCE（嗜多染紅細(xì)胞）細(xì)胞中的微核，因為紅細(xì)胞在成熟前會將主核排出，而保留微核?。


　　使用顯微鏡觀察并計數(shù)微核數(shù)量。