抑菌試驗(yàn)詳細(xì)步驟 抑菌效果檢測(cè)方法

7次 2025.01.15

  抑菌是指抑制細(xì)菌生長(zhǎng)和繁殖,使細(xì)菌的數(shù)量不會(huì)增長(zhǎng)。抑菌不一定能殺滅細(xì)菌,但能防止細(xì)菌數(shù)量過多而導(dǎo)致危害。抑菌試驗(yàn)是一種常用的實(shí)驗(yàn)方法,用于評(píng)估抗菌劑的抑菌效果。其基本原理是將待測(cè)物質(zhì)與細(xì)菌接觸,觀察其對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)的影響。


  抑菌試驗(yàn)詳細(xì)步驟


  抑菌圈測(cè)量是微生物分析的經(jīng)典方法。它是利用抑菌物質(zhì)在涂布特定試驗(yàn)菌的瓊脂培養(yǎng)基內(nèi)成球形立體狀擴(kuò)散,抑制試驗(yàn)菌的繁殖,在抑菌物質(zhì)的周圍形成透明圈,即抑菌圈。抑菌圈的測(cè)定(濾紙片法)詳細(xì)步驟如下:


  1、菌種接種:將保存菌種反復(fù)轉(zhuǎn)種2次,使菌種新鮮,細(xì)菌置30℃,恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)1d,霉菌置27℃,恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)3d,備抗菌實(shí)驗(yàn)用


  2、菌懸液制備:在超凈臺(tái)里將轉(zhuǎn)接后生長(zhǎng)良好的菌種試管斜面注入適量無菌水(約5mL),接種環(huán)輕刮菌落,搖晃,置旋渦混合器混勻。


  3、倒平板:在超凈臺(tái)里將培養(yǎng)基倒入平板,每板約15mL左右,水平放置,凝固后倒置放入30℃恒溫培養(yǎng)箱中,2d后觀察是否有菌落生長(zhǎng),若沒有則可供下一步實(shí)驗(yàn)使用,否則需重新倒平板。


  4、涂布:在超凈臺(tái)里用槍取0.1ml菌懸液注入平板,放置5min左右后用三角耙涂布均勻,每種菌設(shè)置兩個(gè)重復(fù)平板。


  5、貼片:在超凈臺(tái)里將平板平均分為6個(gè)區(qū),對(duì)角設(shè)置平行組,同時(shí)用無菌水做對(duì)照組,硫酸鏈霉素(10U)作陽性對(duì)照。每?jī)蓮垶V紙片(直徑1.1cm或0.6cm)為一貼,用鑷子夾著濾紙片在樣品中輕輕蘸一下后,取出貼在平板的位置,輕摁一下使濾紙片牢固,置(正放)4℃冰箱中放24h。


  6、培養(yǎng):24h后放入(倒置)恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng),細(xì)菌30℃,霉菌27℃。細(xì)菌培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果,霉菌72h后觀察結(jié)果。


  抑菌效果檢測(cè)方法


  1.紙片擴(kuò)散法:將待測(cè)物質(zhì)涂在紙片上,放置在含有細(xì)菌的瓊脂平板上,觀察紙片周圍的細(xì)菌生長(zhǎng)情況,評(píng)估抑菌效果。


  2.微量稀釋法:將待測(cè)物質(zhì)按照一定比例稀釋,與細(xì)菌混合,放置在瓊脂平板上,觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況,根據(jù)最小抑菌濃度評(píng)估抑菌效果。


  3.漏斗法:將待測(cè)物質(zhì)滴入含有細(xì)菌的培養(yǎng)基中,通過漏斗篩選,觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況,評(píng)估抑菌效果。


  4.懸浮液法:將待測(cè)物質(zhì)與細(xì)菌混合,放置在離心管中,離心后觀察沉淀情況,評(píng)估抑菌效果。


  以上是幾種常用的抑菌試驗(yàn)方法。不同的方法適用于不同的實(shí)驗(yàn)需求。在進(jìn)行抑菌試驗(yàn)時(shí),需要注意實(shí)驗(yàn)條件的控制,以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。


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